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想知道激光共聚焦顯微鏡的運行原理就看看這些吧
更新時間:2020-08-07   點擊次數(shù):1004次
  激光共聚焦顯微鏡是近代生物醫(yī)學(xué)圖象儀器。它是在熒光顯微鏡成象的基礎(chǔ)上加裝激光掃描裝置,使用紫外光或可見光激發(fā)熒光探針。
 
  利用計算機進(jìn)行圖象處理,從而得到細(xì)胞或組織內(nèi)部微細(xì)結(jié)構(gòu)的熒光圖象,以及在亞細(xì)胞水平上觀察諸如Ca2+、pH值、膜電位等生理信號及細(xì)胞形態(tài)的變化。
 
  下面讓我們一起來了解一下激光共聚焦顯微鏡的原理是什么吧。
 
  在普通寬視野光學(xué)顯微鏡中,整個標(biāo)本全部都被水銀弧光燈或氙燈的光線照明,圖像可以用肉眼直接觀察 。
 
  同時,來自焦點以外的其他區(qū)域的熒光對結(jié)構(gòu)的干擾較大,尤其是標(biāo)本的厚度在 2um 以上時,其影響更為明顯。
 
  激光共聚焦顯微鏡脫離了傳統(tǒng)光學(xué)顯微鏡的場光源和局部平面成像模式,采用激光束作光源,激光束經(jīng)照明針孔,經(jīng)由分光鏡反射至物鏡,并聚焦于樣品上,對標(biāo)本焦平面上每一點進(jìn)行掃描。
 
  組織樣品中如果有可被激發(fā)的熒光物質(zhì),受到激發(fā)后發(fā)出的熒光經(jīng)原來入射光路直接反向回到分光鏡,通過探測針孔時先聚焦,聚焦后的光被光電倍增管(PMT)探測收集,并將信號輸送到計算機,處理后在計算機顯示器上顯示圖像 。
 
  在這個光路中,只有在焦平面的光才能穿過探測針孔,焦平面以外區(qū)域射來的光線在探測小孔平面是離焦的,不能通過小孔。因此,非觀察點的背景呈黑色,反差增加,成像清晰。
 
  由于照明針孔與探測針孔相對于物鏡焦平面是共軛的,焦平面上的點同時聚焦于照明針孔與探測針孔,焦平面以外的點不會在探測針孔處成像,即共聚焦。
 
  以激光作光源并對樣品進(jìn)行掃描,在此過程中兩次聚焦,故稱為激光掃描共聚焦顯微鏡。
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